Alterazioni cellulari indotte da farmaci d'abuso e da stimoli avversivi non evitabili nel sistema nervoso centrale di ratto

Il lavoro dell’unità operativa sarà orientato a caratterizzare le alterazioni di parametri cellulari e molecolari indotte dall’esposizione a farmaci d’abuso e a stimoli avversivi non evitabili. Più specificatamente, le modificazioni indotte dalle droghe verranno valutate in modelli di sensitizzazione a due tra i più diffusi farmaci d’abuso, quali la morfina ed il delta-9-tetraidrocannabinolo, mentre per quanto concerne le alterazioni indotte da gli stimoli avversivi non evitabili ci avvarremo dei modelli comportamentali messi a punto dalle altre unità partecipanti alla ricerca (Prof. Tagliamonte). Infine, per convalidare il possibile coinvolgimento di specifiche cascate intracellulari nei sopracitati processi ci avvarremo di topi geneticamente mutati che sotto- o sovra-esprimono la proteina di interesse. A tale scopo verranno allestiti i seguenti saggi: 1. binding in autoradiografia per i recettori cannabici e i diversi sottotipi di recettori oppiacei eventualmente seguiti da saggi condotti su membrane delle aree cerebrali trovate positive, per meglio specificare i valori di Kd e Bmax; 2. binding in autoradiografia del [35S]GTPgammaS per valutare l’efficienza di accoppiamento recettore/G proteine, eventualmente seguiti da saggi condotti su membrane delle aree cerebrali trovate positive, per specificare i parametri meccanicistici di tale interazione in termini di Kd, Bmax, EC50 e Emax; 3. valutazione in specifiche aree cerebrali delle variazioni a carico della cascata del cAMP in termini di livelli di cAMP, attività della PKA e induzione dei fattori di trascrizione cAMP correlati (CRE); 4. valutazione in specifiche aree cerebrali della cascata delle MAP Kinasi in termini sia di livelli che di attività, prendendo in considerazione sia ERK1, che ERK2, p38 e JNK. In parallelo, verrà anche studiata l’attivazione dei più comuni fattori di trascrizione ad essi correlati; 5. studio della risposta comportamentale basale, di quella indotta dall’esposizione alle droghe, nonchè dell’apprendimento dell’avversione condizionata al gusto in animali knock out o iperesprimenti Ras-GRF1, fattore attivante di Ras in maniera tirosinkinasi-indipendente e cruciale per la trasduzione mediata da ERK. Testo inglese